使用制备液相色谱的工作流程和技巧

本文的重点是快速液相色谱和高效液相色谱。没有一种完美的协议合适每一种别离目的。因此，建议为您的特定使用程序优化办法。经过本文中列出的建议以及一些前期阅览和测验，您将轻松纯化您正在寻找的组件。

        一、快速液相色谱纯化

        运用快速色谱法进行纯化的缺陷是该办法固有的分辨率较低。快速液相色谱柱运用更大的粒径和柱容量，允许运用更多的开始资料，但以分辨率和纯度为价值。假如化合物不需求更高的纯度，或者假如下一步将进行 HPLC，这或许是您的选择。

        1、确认溶剂体系

        样品的纯度（即混合物中有多少化合物）能够运用薄层色谱法 (TLC) 和组分的相对极性进行定性测定。运用 TLC 预先筛选*佳活动相和固定相将节省时间和金钱。依据所运用的溶剂，您或许需求在通风柜中运转色谱柱，因为存在潜在的危险烟雾。

        2、确认要运用的列

        选择别离柱时要考虑样品量。色谱柱装载量因粒径和体积而异。一般来说，快速液相色谱柱的*大装载量约为硅胶重量的 10%。较大的色谱柱能够处理千克数量的色谱柱，但假如您没有那么多开始资料，那么您只会在硅胶和额定的溶剂上糟蹋金钱来运转这些大型色谱柱。在确认液相剖析柱、基质和溶剂后，您就能够进行快速别离了。

        3、液相色谱柱

        不管您是自己装柱还是购买一根预装柱，按重量核算硅胶与化合物的比例（即硅胶：化合物）都将帮助您完成更有用的别离。恒谱生提供各种硅胶色谱柱，像uHPLCs高效液相C18-AQ剖析柱对亲水性和极性化合物具有更强的保存才能和选择性。

        假如包含了别离不太杂乱的溶液需求 30:1 到 50:1 的比率，但更杂乱的别离或许需求高达 120:1 的比率。手动运转色谱柱时，切勿让溶剂管线低于硅胶，不然气孔会在硅胶上形成看起来像裂缝的长线。这大大降低了别离的功率。

         二、HPLC纯化

       在 HPLC 上运转样品适当简略，因为在快速液相色谱柱上预纯化进程中确认的许多参数都能够使用于此进程。假如您在没有预纯化过程的情况下运转 HPLC 别离，请考虑运用上面列出的指南来开发合适的 HPLC 办法。运用 HPLC 时的另一个考虑因素是核算的背压。因为 HPLC 色谱柱的粒径更小，可完成更高质量的别离，因此这些体系往往在高压条件下运转，而闪蒸别离的压力相对较低。运用有关粒径和形状、色谱柱内径和溶剂规格的信息核算估计的背压。

       与恒谱生技术支持专家进行简略评论能够节省您名贵的时间，并使您能够在瞬间别离化合物！