高效液相色谱日常维护要点-冲洗

色谱分析的重要作用之一是对样品进行定量，色谱定量的依据是：组分的分量或浓度与检测器的呼应信号成正比。挑选适宜的定量办法时，除需求考虑相对定量仍是jue对定量外，一起也需求考察化合物的线性呼应范围、是否有适宜内标、是否有规范品等。常见的定量办法有内标法、外标法、面积归一法、加校对因子的主成分本身对照法与不加校对因子的主成分本身对照法等。本文将对常用的内标法、外标法、面积归一法三种办法进行介绍。

内标法

内标法是将必定分量的纯物质作为内标物加到必定量的被分析样品混合物中，依据测试样和内标物的质量比及其相应的色谱峰面积之比及相对校对因子，来核算被测组分的含量。

精细称（量）取对照品和内标物质，别离配成溶液，各精细量取适量，混合配成校对因子测定用的对照溶液。取必定量进样，丈量对照品和内标物质的峰面积，核算校对因子。

再取按规范制备中含内标物质的供试品溶液，进样，丈量供试品中待测成分和内标物质的峰面积，再核算含量（其间Ax：供试品图中待测成份峰面积；A`S: 供试品图中内标物峰面积；C`S：供试品图中内标物浓度）。

内标物的挑选要求：

a原样品中不含组分；

b与待测物保留时刻应接近，但不重叠；

c为高纯度规范物质，或含量已知物质；

d在给定色谱条件下具有必定化学稳定性。

外标法

外标法是用待测组分的纯品作对照物质，以对照物质和样品中待测组分的呼应信号相比较进行定量的办法。它不是把规范物质加入到被测样品中，而是在与被测样品相同的色谱条件下独自测定，把得到的色谱峰面积与被测组分的色谱峰面积进行比较求得被测组分的含量。此法可分为外标一点法与规范曲线法。

规范曲线法：是用对照物质制造一系列浓度的对照品溶液确定作业曲线，求出斜率、截距。在完全相同的条件下，精确进样与对照品溶液相同体积的样品溶液，依据待测组分的信号，从规范曲线上查出其浓度，或用回归方程核算，作业曲线法也可以用外标二点法代替。