高效液相色谱仪（HPLC）原理及应用

1.高效液相色谱仪原理--简介

高效液相色谱仪也叫高压液相色谱、高速液相色谱、高别离度液相色谱等，它是在经典液相色谱法的基础上，于60年代后期引入了气相色谱理论而迅速发展起来的。它与经典液相色谱法的区别是填料颗粒小而均匀，小颗粒具有高柱效，但会引起高阻力，需用高压输送活动相，故又称高压液相色谱。又因剖析速度快而称为高速液相色谱。

色谱法的别离原理是：溶于活动相(mobile phase)中的各组分经过固定相时，因为与固定相(station phase)发生作用(吸附、分配、排阻、亲和)的大小、强弱不同，在固定相中滞留时刻不同，然后先后从固定相中流出。又称为色层法、层析法。

高效液相色谱法的使用规模十分广泛，对样品的适用性广，不受剖析目标挥发性和热稳定性的约束，几乎所有的化合物包括高沸点、极性、离子型化合物和大分子物质均可用高效液相色谱法剖析测定，因而弥补了气相色谱法的缺乏。在现在已知的有机化合物中，可用气相色谱剖析的约占20% ，而80% 则需用高效液相色谱来剖析。

因为HPLC剖析不受温度和样品沸点约束，因此具有更广阔的使用潜力。经过30多年的迅速发展，高效液相色谱法在基础理论、仪器装置和色谱柱等方面的研讨已趋于成熟，现已成为化学化工、环境、药学、食物等多个领域中*具优势的别离剖析办法之一。

液相色谱依据别离机理的不同可分为：

液固吸附色谱

液液分配色谱

离子交换色谱

离子对色谱法

分子排阻色谱(或凝胶渗透色谱)

（一）液-固吸附色谱

      活动相为液体，固定相为固体吸附剂，依据物质吸附作用的不同来别离物质。

（二）液-液分配色谱

      活动相和固定相都是液体的色谱法即为液-液色谱，是利用样品组分在两种不相溶的液相间的分配来进行别离。一种液相为活动相，另一种是涂于载体上的固定相。

（三）离子交换色谱

（四）离子对色谱法

（五）分子排阻色谱法

二、HPLC的使用

在环保方面，HPLC能够使用在：

（1）农药残留量剖析 ：含氯农药 、有机磷 农药 、除虫菊等

（2）致癌物质：硝基呋喃及其代谢物、霉素、亚硝胺、苯并芘等

（3）水质剖析：内分泌污染物等

在生化方面，HPLC能够使用于：

（1）蛋白质剖析

（2）肽类的剖析

（3）核酸剖析

（4）氨基酸剖析