高效的液相色谱仪

高效液相色谱仪(HPLC)是运用高效液相色谱原理，首要用于剖析高沸点不易挥发的、受热不稳定的和分子量大的有机化合物的仪器设备。它由储液器、泵、进样器、色谱柱、检测器、记录仪等几部分组成。储液器中的活动相被高压泵打入体系，样品溶液经进样器进入活动相，被活动相载入色谱柱(固定相) 内，因为样品溶液中的各组分在两相中具有不同的分配系数，在两相中做相对运动时，经过反复多次的吸附- 解吸的分配进程，各组分在移动速度上发生较大的不同，被别离成单个组分顺次从柱内流出，经过检测器时，样品浓度被转换成电信号传送到记录仪，数据以图谱方法打印出来。HPLC广泛运用于生命科学、食品科学、药物研讨以及环境研讨中。

原理

储液器中的活动相被高压泵打入检测体系，样品溶液经进样器进入活动相，被活动相载入色谱柱（固定相）内，因为样本溶液中的各组分在两相中具有不同的分配系数，在两相中作相对运动时，经过反复多次的“吸附-解吸”的分配进程，各组分在移动速度上发生较大的不同，被别离成单个组分顺次从柱内流出，经过检测器时，样本浓度被转换成电信号传送到记录仪，数据以图谱方法输出检测成果。

依据别离机制的不同，HPLC原理可分为液固吸附色谱法、液液分配色谱法（正相与反相）、离子交流色谱法及分子排阻色谱法。

1. 液固吸附色谱法

液固吸附色谱法中，固定相为固体吸附剂，依据各组分吸附才能差异而使组分得以别离。常用的吸附剂为硅胶或氧化铝，大多数用于非离子型化合物。吸附色谱固定相能够分为极性和非极性两大类。对活动相的要求为：

1) 选用的溶剂应当与固定彼此不相溶，并能保持色谱柱的稳定性。

2) 选用的溶剂应有高纯度，以防所含微量杂质在柱中堆集，引起柱功用的改动。

3) 选用的溶剂功用应与所运用的检测器相匹配，如果运用紫外吸收检测器，就不能选用在检测波长下有紫外吸收的溶剂；若运用示差折光检测器，就不能用梯度洗脱。

4) 选用的溶剂应对样品有足够的溶解才能，以进步测定的灵敏度。

5) 选用的溶剂应具有低的黏度和恰当低的沸点。

6) 应尽量避免运用具有显著毒性的溶剂，以保证工作人员的安全。

液固色谱法是以外表吸附功用力为依据的，所以它常用于别离极性不同的化合物，也能别离那些具有相同极性基团，但数量不同的样品。

2. 液液分配色谱法

固定相为液体，依据被别离的组分在活动相和固定相中的溶解度不同而别离。依固定相和活动相的极性不同可分为正相色谱法和反相色谱法。正相色谱法选用极性固定相，活动相为相对非极性的疏水性溶剂，常用于别离中等极性和极性较强的化合物；反相色谱法一般用非极性固定相，活动相为水或缓冲溶液，适用于别离非极性和极性较弱的化合物。其间，反相色谱运用*广。

3. 离子交流色谱法

固定相是离子交流树脂。树脂上可电离离子与活动相中具有相同电荷的离子及被测组分的离子进行交流，依据各离子与离子交流基团具有不同的电荷吸引力而别离。

4. 分子排阻色谱法

分子排阻色谱法又称凝胶色谱法，它是依照分子尺度大小顺序进行别离的一种色谱办法。分子排阻色谱法的固定相凝胶是一种多孔性的聚合资料，有必定的形状和稳定性，运用分子筛对分子量大小不同的各组分排阻才能的差异而完结别离。依据所用活动相的不同，凝胶色谱法能够分为两类：即用水溶剂做活动相的凝胶过滤色谱法(GFC)与用有机溶剂如四氢呋喃做活动相的凝胶渗透色谱法(GPC)。

延伸

在同一色谱条件下，样品中K值大的组分在固定相中停留时间长，后流出色谱柱；K值小的组分则停留时间短，先流出色谱柱。混合物中各组分的分配系数相差越大，越简单别离，因而混合物中各组分的分配系数不同是色谱别离的前提。

在HPLC中，固定相确定后，K首要受活动相的性质影响。实践中首要靠调整活动相的组成配比及pH值，以取得组分间的分配系数差异及适合的保存时间，达到别离的目的。

色谱

（high performance liquid chromatography,HPLC）也叫高压液相色谱（high pressure liquid chromatography）、高速液相色谱（high speed liquid chromatography）、高别离度液相色谱（high resolution liquid chromatography）等或Efficient liquid chromatographyspectrometry。是在经典液相色谱法的基础上，于60年代后期引入了气相色谱理论而敏捷发展起来的。它与经典液相色谱法的区别是填料颗粒小而均匀，小颗粒具有高柱效，但会引起高阻力，需用高压运送活动相，故又称高压液相色谱。又因剖析速度快而称为高速液相色谱。

高效液相色谱是运用*多的色谱剖析办法，高效液相色谱体系由活动相储液体瓶、输液泵、进样器、色谱柱、检测器和记录器组成，其全体组成类似于气相色谱，可是针对其活动相为液体的特点作出许多调整。HPLC的输液泵要求输液量恒定平稳；进样体系要求进样便当切换严密；因为液体活动相粘度远远高于气体，为了减低柱压高效液相色谱的色谱柱一般比较粗，长度也远小于气相色谱柱。HPLC运用十分广泛，几乎遍及定量定性剖析的各个领域。

运用高效液相色谱时，液体待检测物被注入色谱柱，经过压力在固定相中移动，因为被测物种不同物质与固定相的彼此作用不同，不同的物质顺序离开色谱柱，经过检测器得到不同的峰信号，*后经过剖析比对这些信号来判断待测物所含有的物质。高效液相色谱作为一种重要的剖析办法，广泛的运用于化学和生化剖析中。高效液相色谱从原理上与经典的液相色谱没有实质的不同，它的特点是选用了高压输液泵、高灵敏度检测器和高效微粒固定相，适于剖析高沸点不易挥发、分子量大、不同极性的有机化合物。

结构及功用

HPLC仪一般由溶剂运送体系、进样体系、别离体系（色谱柱）、检测体系和数据处理与记录体系组成，详细包括储液器、输液泵、进样器、色谱柱、检测器、记录仪或数据工作站等几部分。其间输液泵、色谱柱和检测器是HPLC仪的关键部分。

1. 溶剂运送体系

储液器：用来贮存数量足够、符合要求的活动相。配有溶剂过滤器，以避免活动相中的颗粒进入泵内。

脱气器：脱气的目的是为了避免活动相从色谱柱内流出时释放出气泡进入检测器，然后引起噪声，不能正常检测。

输液泵：将储液器中的活动相连续不断地以高压方法进入液路体系，使样品在色谱柱中完结别离进程。

梯度洗脱设备：是在别离进程中经过逐渐改动活动相的组成添加洗脱才能的一种设备。

2. 进样体系

进样器：是将样品送入色谱柱的设备，进样方法能够分为两种：阀进样或自动进样。比较常用的是选用自动进样器装样。

3. 别离体系

色谱柱：对样品进行别离，是整个色谱体系的心脏，它的质量好坏直接影响到别离的作用。

4. 检测体系